做SOEPCR
做SOE PCR 无论如何都连接不上,哪位能帮忙想想办法!~~~ -
3. 分别回收第2步所得两条PCR产物（一定要用胶回收，准确回收两条目的条带）。4. 将第3步所得两份PCR产物进行混合使其互为模板及引物，加入dNTP及Pfu或Taq酶进行PCR。进行PCR约5-10轮即可。5. 取第4步PCR产物做为模板，加入引物F及R进行PCR扩增出具有突变的全基因。建议可以优化退火温度，可以希望你能满意。
这就是我们在设计引物的时候在a2的3端加入了20个b基因5端的序列，在b1的5端加入了20个a基因3端的序列。我们来看重叠pcr的步骤：（1）以a1,a2扩增a基因，b1，b2扩增b基因（2）回收a，b基因（3）以a，b为共同的模板，a1和b2为引物，扩增a+b，这样我们就利用重组pcr的方法将a+b拼接起来了。..
3. 分别回收第2步所得两条PCR产物（一定要用胶回收，准确回收两条目的条带）。4. 将第3步所得两份PCR产物进行混合使其互为模板及引物，加入dNTP及Pfu或Taq酶进行PCR。进行PCR约5-10轮即可。5. 取第4步PCR产物做为模板，加入引物F及R进行PCR扩增出具有突变的全基因。建议可以优化退火温度，可以希望你能满意。
这就是我们在设计引物的时候在a2的3端加入了20个b基因5端的序列，在b1的5端加入了20个a基因3端的序列。我们来看重叠pcr的步骤：（1）以a1,a2扩增a基因，b1，b2扩增b基因（2）回收a，b基因（3）以a，b为共同的模板，a1和b2为引物，扩增a+b，这样我们就利用重组pcr的方法将a+b拼接起来了。..
通过重叠延伸拼接技术（sequence：overlapped：extension，SOE-PCR），各寡聚核苷酸又作为模版，使单链部分补齐成为双链；DNA变性成单链，各单链寡聚核苷酸片段之间仍有1924个核苷酸的重叠序列，两个单链部分再经SOE-PCR补齐，获得双链。
PS:做T 克隆时，回收产物只要有就够了，不需要太多的回收产物，即使你回收后的产物电泳检测都看不到都没关系，T 克隆很容易的。关于胶回收问题，我不知道你的片段大概多少，用的什么公司的回收试剂盒。For SOE-PCR: 1, never use the SOE-PCR product as the 2ndary PCR template, since it 是什么。
DNA电泳条带为什么有时候跑不开呢 -
PS:做T 克隆时，回收产物只要有就够了，不需要太多的回收产物，即使你回收后的产物电泳检测都看不到都没关系，T 克隆很容易的。关于胶回收问题，我不知道你的片段大概多少，用的什么公司的回收试剂盒。For SOE-PCR: 1, never use the SOE-PCR product as the 2ndary PCR template, since it 是什么。